Диагностика
Материалом для бактериологического исследования являются трупы грызунов, от погибших животных – лимфатические узлы, кусочки патологически измененных паренхиматозных органов. Схема исследования включает: бактериоскопию, выделение чистых культур и биологический метод.
Из исследуемого материала готовят мазки, которые окрашивают по Грамму и Романовскому - Гимзе. Посевы проводят на МПА, МПБ, а так же специальные обогащенные среды, дифференциальную среду Серова или агар Хоттингера с генцианвиолетом в концентрации 1: 200000. Заражают подкожно белых мышей или лучше морских свинок. Мыши гибнут на 3-7е сутки, свинки на 3-13е сутки.
При исследовании на псевдотуберкулез овец в лабораторию направляют трупы овец или измененные участки паренхиматозных органов и лимфатические узлы. Схема исследований аналогична описанной выше. Возбудитель псевдотуберкулеза овец легко дифференцируется от ерсиний псевдотуберкулеза: это неподвижный, грамположительный, не окрашивающийся биполярно и не ферментирующий глюкозу микроб.
Необходимо псевдотуберкулез дифференцировать от туберкулеза по следующим признакам: возбудитель некислотоустойчив (возбудитель туберкулеза кислотоустойчив), палочки легко растут на обычных питательных средах (возбудитель туберкулеза медленно), в мазках из очагов обнаруживают грамположительные палочки (при туберкулезе находят палочки, красящиеся по Циль-Нильсену), при посеве из очага легко удается выделить культуру возбудителя (при туберкулезе для выделения культуры заражают лабораторных животных), узелки быстро развиваются, размягчаются, появляется творожистое перерождение (при туберкулезе узелки твердые, сильно пролиферирующие и крупноклеточные), в очагах не бывает отложения извести (при туберкулезе очаги обызвествленные), очаг рано инкапсулируется, капсула утолщается и имеет гладкую внутреннюю поверхность (при туберкулезе очаг окружен фибринозной соединительной тканью).
Так же ерсинию псевдотуберкулеза необходимо отличить от возбудителя зооантропонозной чумы. При этом ориентируются по таким признакам: бактерия чумы неподвижна, лизируется чумным бактериофагом, не растет на среде Бессоновой (голодный агар), не разлагает мочевину, патогенна в R-форме, обладает пестиногенностью; ерсиния псевдотуберкулеза подвижна, лизируется псевдотуберкулезным фагом, растет на среде Бессоновой, разлагает мочевину с образованием щелочи, патогенна в S-форме, пестиногенностью не обладает.
В серологической диагностике используют реакции агглютинации (РА) и непрямой гемагглютинации (РНГА). Диагностическим титром может считаться для РА 1:200, для РНГА 1:100. Достоверным диагностическим критерием при использовании данных методов является четырехкратное нарастание титра специфических антител в динамике заболевания при исследовании парных сывороток. Использование серологических методов, основанных на обнаружении специфических антител к антигенам иерсиний, имеет ряд серьезных недостатков, основными из которых являются невысокая специфичность и поздние сроки подтверждения диагноза.
Использование в качестве диагностикума очищенной псевдотуберкулезной гипериммунной сыворотки позволило создать несколько экспресс-методов обнаружения антигенов иерсиний в организме больных: РНГА, РНИФ (реакция непрямой иммунофлуоресценции), РКА (реакция коагглютинации), латекс-агглютинация, ИФА (иммуноферментный анализ). Эти методы позволяют обнаружить антигены иерсиний в различных биологических средах организма в первые дни заболевания.
В настоящее время апробированы и в ближайшем будущем найдут широкое практическое применение для диагностики псевдотуберкулеза такие современные методы, как иммуноблотинг и полимеразная цепная реакция (ПЦР). Эти методы значительно увеличивают вероятность правильного лабораторного диагноза уже при первом обследовании больного. Так, для постановки диагноза при помощи ПЦР достаточно несколько молекул ДНК иерсиний в исследуемом материале.